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Kristallisation
Lysozymkristalle im polarisierten Licht
Kristallisation
Die Kristallisaton wird mit einer Lysozymlösung (Fluka #62971) der Konzentration 100 mg/ml durchgeführt. Die verwendete Methode ist die der Dampfdiffusion mit einem sitting drop Experiment. Die Proteinlösung wird der Mutterlauge gemischt und in einem abgeschlossenen Gasraum über einem Reservoir aus Mutterlauge inkubiert. Durch Evaporation wird die Proteinlösung langsam übersättigt und auf diese Weise die Vorraussetzung für die Kristallisation geschaffen.
Schema:
Versuchsdurchführung:
Pro Kammer werden 300 ul Reservoirlösung pipettiert, dabei wird die Konzetration des Präzipitanten NaCl von 0.6 M bis 1.2 M variiert. Für den Proteintropfen wird 1 ul der Proteinlösung mit 1 ul der Reservoirlösung gemischt. Die Kammern werden mit Klebefolie luftdicht verschlossen. Der Erfolg des Versuchs wird am Mikroskop verfolgt.
Reservoirlösung: 0.1 M Natriumcitrat (pH 4.5), 0.6 – 1.2 M Natriumchlorid
